300 opowiada historię bitwy pod Termopilami w 480 r. p.n.e. Persowie pod rządami króla Kserksesa przejęli już część greckich miast-państw, a teraz zagrażają Sparcie i Atenom. Królowi Leonidasowi ze Sparty pozostają dwie opcje: albo będzie musiał poświęcić się dla dobra Sparty, albo patrzeć, jak płonie doszczętnie. Wybierając to pierwsze, Leonidas tworzy armię 300 spartańskich wojowników, aby zablokować wąskie przejście Termopil, gdzie Kserkses zamierza dotrzeć do Hellady. 300 towarzyszy około 700 Thespianów, którzy chronią flanki przejścia, a połączone siły zdołały zabić dziesiątki tysięcy Persów i uniemożliwić im wejście do Hellady przez kilka dni. Jednak Efialtes, odrzucony z armii spartańskiej, mści się, pokazując Kserksesowi tajne przejście dla kozy po bokach przejścia. Historia przedstawia epicki ostatni bastion najlepszych spartańskich żołnierzy, którzy są świadomi swojego losu, ale motywowani „honorem i chwałą”, postrzegają bitwę jako swój obowiązek, aby jak najdłużej chronić resztę Grecji.
